慢病毒濃縮試劑包括多個存儲模組,存儲模組包括固定座、設(shè)于固定座上的存放槽、設(shè)于存放槽底部的支撐臺、設(shè)于存放槽上側(cè)的位環(huán);試劑管放置于存放槽內(nèi);提高了試劑管在存儲以及運輸過程中的穩(wěn)定性。通常用于實驗室、產(chǎn)品研發(fā)部等地方,而有時在將攜帶有慢病毒的試劑管存儲在純化試劑盒內(nèi)后,需要將試劑盒運輸至特定的區(qū)域內(nèi),在存儲、運輸?shù)倪^程中,目前的試劑盒容易出現(xiàn)試劑管傾倒或與試劑盒內(nèi)部產(chǎn)生碰撞的情況,進而導致試劑管破裂,使得試劑管內(nèi)部的慢病毒溢出,進而造成嚴重的污染,不利于試劑管的運輸以及存儲。
慢病毒濃縮試劑使用說明:
1.收集慢病毒上清液,0.45um濾膜過濾,以除去細胞和碎片。
Note:如果使用濾膜過濾,只能使用低蛋白結(jié)合力的纖維素醋酸酯或聚醚堿(PES)膜。不能用硝酸纖維素膜(NC)。
2.將慢病毒上清與試劑盒中的濃縮液按照4:1的比例混合(上清液4份,濃縮液1份),4C孵育2h或過夜。剛開始時每隔30min混勻一下,進行3次。
Note:若時間不寬裕,可將孵育時間縮短為幾小時。慢病毒顆粒在4C可以穩(wěn)定保存數(shù)天。
3.于4℃,水平轉(zhuǎn)子4000g離心25min。
Note:角轉(zhuǎn)子會將病毒離心到管壁上,仔細分辨管壁上的白色沉淀并將其沖洗下來。
4.小心去除上清,不要晃動管子,一般可見白色沉淀(有時沉淀不可見)。
5.用初始體積(原上清液體積)1/10-1/100的DMEM或PBS重懸病毒顆粒,小心吹打均勻,重懸沉淀物。
6.測定濃縮慢病毒樣品的滴度,50uL/管分裝,于-80C冰箱保存。
Note:慢病毒凍存液避免反復凍融,否則會降低病毒滴度。